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      生物透射電鏡TEM測試檢測

      • 國家
        日本日立
      • 型號
        H7650/ HT7800
      • 測試項目
        適合觀察細菌、組織、細胞、器官等生物樣品的超微結構和高分子、膠束等有機樣品
      • 樣品要求
        樣品需要固定在戊二醛溶液中,樣品厚度1mm長2-3mm寬2-1.5mm
      • ●  樣品要求:
        大       ?。簶悠泛穸?mm長2-3mm寬2-1.5mm,取材太大會嚴重影響實驗結果,同一標本可取2-3條組織,2.5%中性戊二醛固定液要裝滿;取樣需要準確,則會觀察不到目標結構。
        官腔類樣品:對動物的管腔類樣品(腸道、血管等)在固定之前用10%胰蛋白酶消化處理,時間5分鐘,處理后用PBS清洗三次,再用2.5%中性戊二醛固定;
        植物、昆蟲等密度比固定液低的樣品:必須先用針筒或抽真空儀器先抽氣,再使標本沉入2.5%中性戊二醛液中;
        時      間:標樣浸入2.5%中性戊二醛中的時間不能超過一周,需要低溫(2-8°)保存,嚴禁冷凍。
        如果送樣中有對比樣品請用編號標出,并說明,并且需要提供參考文獻中的圖片做為參考。(即原樣和特殊處理過的樣品比對)
         
        ●  技術參數:
        技術指標
        分辨率:0.2nm (晶格像)
        加速電壓:40kV ~ 120kV
        連續模式:x200~x600,000
        低倍模式:x50 ~ x1,000
        圖像旋轉:
        倍率范圍:x1,000 ~ x40,000
        旋轉角度:±90o (15o每步)
        數字相機:1,024 x 1,024象素
        樣品臺:測插式優中心測角臺
        樣品臺移動:X/Y:±1mm Z:±0.3mm
        傾斜角度:±20o(±60o可選)
        功能:圖像導航功能和樣品位置記憶功能
        檢測合作案例請點擊案例欣賞(獲取更多案例,請聯系業務人員)
      •   生物透射電鏡樣品選材辦法

          (一)安排和器官選材辦法:

          事前準備好所需的器械和固定液,并把它放4℃冰箱內預冷備用。如為穿刺物(腎安排、肝安排、脾安排等)、剪取物(胃鏡剪取物、支氣管鏡剪取物、腸鏡剪取物等)、手術切除物(腫瘤安排以及試驗動物臟器等),均應在離體后敏捷用生理鹽水沖刷后或直接投入預冷的2.5%戊二醛固定液(保質期為1個月)內,并把它放4℃冰箱內保存,一般要求在兩分鐘內完結。在處理手術切除物時,應事前準備好兩把尖利的刀片(如剃須刀或手術刀)和蠟板,把固定液滴在蠟板上,再把切下來的臟器用手術刀切成小塊,放在蠟板上的固定液中,接著用雙刀片拉鋸法在固定液中將安排切成約1立方毫米巨細或橫切面約1平方毫米的長條形,然后用牙簽或鑷子(悄悄夾住,制止揉捏)把安排移入裝有固定液的小瓶內,瓶子主張用帶螺紋密封的樣本瓶(見下圖),保證固定液不會溢出,固定液一定要加注到瓶子的九成滿。如為肺安排,應在固定液中充沛震動,使其完全沉到瓶底停止。

          (二)游離細胞選材法:

          安排培育和游離細胞(如血細胞、掉落細胞以及細菌病毒等),常懸浮渙散在介質中,首要有必要將其凝聚成團,然后進行固定,詳細做法如下:

          1、血漿凝聚法:將抗凝全血離心分層(2000轉/每分鐘,10—20分鐘),用毛細吸管沿著管壁悄悄的將上清夜汲取(不要損壞白細胞層),接著用吸管汲取固定液,并沿著管壁將2.5%戊二醛固定液慢慢地參加進行固定,然后把它放在4℃冰箱內保存。

          2、血漿(血清)混合法:如為細菌、病毒、掉落細胞、培育細胞則先將它們制成懸液放置于離心管內(最好是玻璃的),離心成團(1000~3000轉/分鐘,10分鐘,下同),去上清液后參加2.5%戊二醛固定10分鐘左右,離心,再棄去多余的固定液,然后和少量抗凝血漿或血清混合均勻,離心成團,去上清液(留少量),用吸管汲取2.5%戊二醛固定液沿著離心管壁緩慢滴入,盡量防止團塊渙散,靜置于4℃冰箱內保存備用。

          二、選材要求

          電鏡生物樣品制備的關鍵在于制出的樣品有必要忠實地反映其日子時的狀況,盡量防止“身后改動”和人為假象的發作,因而,選材這一步非常重要。選材要求如下:

          1、冷:選材的器械和固定液均應事前在4℃冰箱內預冷。

          2、快:選材時動作要快,所用的刀片要尖利,一般要求在臟器離體后1—2分鐘內選材結束并放入2.5%戊二醛固定液內于4℃冰箱內保存。別的,應防止對安排的揉捏和人為損害。

          3、?。簽榱四茏尠才懦渑婀潭?,有必要把安排切成盡可能小的塊,一般要求安排塊在1立方毫米左右或橫切面為1平方毫米的長條形,長度一般不超越3毫米,而皮膚、肌腱等安排較細密,選材應在1立方毫米以內。

          4、準:由于電鏡標本要求小塊選材,為了電鏡調查的精確性,選材部位有必要要精確,并且,不同試驗組的標本盡量取在相同部位(如心肌安排取左心室,則一概取左心室),不然,將無法比較,進而影響調查結果,最終導致電鏡調查失利。

          三、各種安排選材辦法:

          腦安排選材法

          在一般情況下,腦安排先進行灌注固定(4%多聚甲醛溶液),待固定完結后應立刻翻開顱骨,暴露出所要選材的方位,依據選材的要求以及試驗意圖割取相應的部位,如研討腦神經軸索、髓鞘以及神經膠質細胞,主張選材于腦安排白質部分,此處有髓神經纖維相對較多,膠質細胞比較豐富;如要研討神經元以及血腦屏障結構,主張選材于腦皮質的灰質部分,并且最好做定向包埋,以神經元長軸方向(大約為腦安排的矢狀面)作為切面方向,這樣能夠很好地調查神經元細胞核、軸突以及樹突結構的改變,突觸以及毛細血管的結構也比較簡單見到。

          肺安排選材法

          我們一定會覺得肺安排選材比較困難,由于肺安排內部氣體無法完全排放而導致安排懸浮于固定液外表,使得固定液不能及時滲透進安排內部而導致大部分安排固定不良或無法固定?,F在發起的仍是主動脈灌注固定。假如條件不老練,只能采納浸泡固定。安排取出后盡量切得小,一起運用震動的辦法將安排沉入固定液中,還有一種辦法就是將安排放在載玻片上,并將固定液滴在其上,用別的一片載玻片悄悄壓在上面并悄悄揉捏,一壓一松,能夠看到固定液內有小氣泡溢出,直到小氣泡消失停止,但有必要留意力度不能太大,不然,安排的細胞將會被損壞。

          需求留意的是,在固定之前,選材者有必要清楚自己的研討意圖,然后采納相應部位進行選材。假如以研討支氣管黏膜為主的(這兒指肺內的支氣管),盡量選材于靠近肺門部位,這兒有具有軟骨的大支氣管,在肺葉的內側1/2部分,有小支氣管、細支氣管以及終末細支氣管;假如首要研討肺泡上皮細胞、終末細支氣管、呼吸性細支氣管以及肺泡隔的結構等,主張選材于肺葉靠近胸膜一側或許肺尖部;假如研討肺動脈內皮或壁的結構,主張選材于肺門鄰近的肺葉安排,這兒的巨細動脈數量比較多,而遠側肺呼吸部的動脈極少。

          睪丸及附睪安排選材辦法

          由于睪丸安排比較松軟,固定難度較大,現在大多采納灌注固定法進行固定,但此辦法假如處理不妥,很可能會形成固定不良,原因是睪丸的血供離心臟比較遠,固定液難以抵達,睪丸曲細精管基膜比較厚,固定液難以滲透,導致固定不良。堂兄弟院校電鏡室了解到,我們還能夠選用打針固定法即用打針針直接插入睪丸內部,從多個方向進行打針固定液,然后割取調查部位進行進一步浸泡固定;別的一種辦法就是直接割取調查部位進行浸泡固定,需求留意的是,選材的睪丸安排有必要切的很細,讓固定液直接滲透入曲細精管的斷面,這樣,各層生殖細胞都會得到很好的固定,不過比較費事的就是每次操作后都要離心處理。

          別的需求留意的是,要調查生精細胞,有必要選材于睪丸的睪丸網部位,假如選材于直精小管部位,就看不到生精細胞了,切切留意!大鼠與小鼠的睪丸網比較表淺,就在白膜下鄰近。假如要調查老練精子,最好選材于附睪的尾部,此處精子已根本老練,并且精子密度最高。

          腎安排選材法

          腎外包被一層薄膜,首要由纖維安排和少量平滑肌組成。一般腎標本選材部位在腎本質,本質由皮質與髓質兩部分組成,一般選材部位在腎皮質,皮質位于腎的外周,其厚度因動物品種不同而有差異,一般在1mm—4mm。腎安排除了采納灌注固定外,直接浸泡固定的作用也是比較滿意。腎安排選材相對比較簡單,一般臨床上均選用穿刺術,然后依據需求切取皮質或髓質進行調查。動物腎安排選材要留意的是,一要選材方位選擇在腎的上極,二要精確斷定皮質與髓質的方位,假如是皮質部位,只要將包膜別離后,將腎最外層安排取下來即可,這兒一般都會有腎小球存在。

          動脈選材法

          動脈遍及全身,直徑巨細不同,一般小動脈(直徑小于1mm)切生長約2mm短柱狀即可.假如是大動脈,能夠將動脈剖開,沿著縱軸將動脈壁切成約長2mm寬1mm的長條形.留意,在選材時盡量運用尖利的刀片(最好用剃須刀),且不要揉捏血管,由于血管內皮比較軟弱,簡單受傷掉落.包埋時應作好定向包埋.

          骨安排選材法

          骨安排散布廣,有的較硬,有的較軟,骨安排由于無機物堆積較多(首要為鈣鹽的堆積)而較硬,有必要通過脫鈣處理(軟骨安排能夠不必脫鈣)。

          首要將骨安排切取一小片,大約1-2毫米巨細,通過4%戊二醛固定2小時以上,再經生理鹽水漂洗后放入脫鈣液內進行脫鈣,一般選擇溫文的EDTA脫鈣液(詳細配方可參閱相關資料,這兒不詳細敘說)進行脫鈣,也可運用酸類進行脫鈣,脫鈣時刻視脫鈣液不同而有差異,至于判別脫鈣程度如何,能夠運用鑷子夾住骨片,悄悄將兩端向中心壓攏,感覺其彈性強度進而判別脫鈣程度。脫鈣完結后先經生理鹽水漂洗后再用4%戊二醛固定2小時,然后按慣例辦法進行處理。

          四、需求客戶供給的資料:

          1、依照規范辦法選材固定的試驗樣本(固定在戊二醛固定液中的樣品)。

          2、透射電鏡試驗登記表,可將此資料電子版發送給對應的業務人員。

          五、樣本貯存運送規范:

          1、貯存:樣本選材后,4℃保存時刻不超越1 個月。

          2、運送:泡沫盒+冰袋的辦法運送,樣品用氣泡膜包裹,防止標本瓶直觸摸摸冰塊,固定液加注至瓶體的九成滿,牢記運用上述帶螺紋和鋁箔墊片的樣本瓶,以免郵寄途中液體滲出,并在瓶體標示好編號。

          六、固定液配方

          A.2.5﹪戊二醛固定液的配方:0.2M 磷酸緩沖液50ml,25﹪戊二醛溶液(電鏡專用) 10ml,加雙蒸水至100ml,戊二醛溶液最終濃度為:2.5%,pH 值7.3-7.4,既是2.5%的電鏡固定液。配比好的固定液一定要放入4℃冰箱低溫冷藏。

          B.聯絡我公司購買配比好的2.5%戊二醛固定液,但需求冷藏運送。


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